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考馬斯亮蘭的測定含量
  • 發(fā)布日期:2022-12-15      瀏覽次數(shù):688
    • 簡介

      該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較精確的,但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結(jié)果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細胞骨架的檢驗。

      濃染液

      100mg考馬斯亮藍G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL 85%的磷酸,然后,用蒸餾水補充至1000mL,此染液放4℃至少6個月保持穩(wěn)定。

      樣本準備

      盡量使用與待測樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標準品,例如測定抗體,可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的,也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪制標準曲線。

      溶解

      將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中,該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。

      稀釋

      1:5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液,如出現(xiàn)沉淀,過濾除去。

      作用

      每個樣本加5mL稀釋的染料結(jié)合溶液,作用5~30min。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后,將由紅色變?yōu)樗{色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min。

      計算

      根據(jù)標準曲線計算待測樣本的濃度。


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