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防止RNA酶污染的方法有哪些?
  • 發(fā)布日期:2021-06-04      瀏覽次數:1033
    • 防止RNA酶污染的措施

      1. 所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。

      2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯-仿沖洗(注意:有機玻璃器具因可被氯-仿腐蝕,故不能使用)。

      3. 有機玻璃的電泳槽等,可先用去污劑洗滌,雙蒸水沖洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室溫10min,然后用0.1% DEPC水沖洗,晾干。

      4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC,在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑,應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制,然后經0.22μm濾膜過濾除菌。

      5. 操作人員戴一次性kou罩、帽子、手套,實驗過程中手套要勤換。

      6. 設置RNA操作專用實驗室,所有器械等應為專用。

      常用的RNA酶抑制劑

      1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹-底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性。

      2. 異硫氰酸胍:目前被認為是zui有-效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來,又對RNA酶有強烈的變性作用。

      3. 氧釩核糖核苷復合物:由氧化釩離子和核苷形成的復合物,它和RNA酶結合形成過渡態(tài)類物質,幾乎能完-全抑制RNA酶的活性。

      4. RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑,可以和多種RNA酶結合,使其失活。

      5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有一定抑制作用

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